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實驗室日常的一天,從離心開始

發布時間:2022-05-13 閱讀3

實驗室日常的一天,從離心開始

今天是食品檢驗科的病毒檢測,下面介紹是的是軟質水果和生食蔬菜的諾如病毒的提取。

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軟質水果和生食蔬菜的病毒提取步驟:


1、將25g軟質水果或生食蔬菜切成約2.5cmX2.5cmX2.5cm的小塊(如水果或蔬菜小于該體積,可不切)。

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2、將樣品小塊移至帶有400 mL網狀過濾袋的樣品袋,加入40 mLTGBE溶液(軟質水果樣品,需加入30U A.niger果膠酶,或1140U A.aculeatus果膠酶),加入10μL過程控制病毒。

3、室溫,60次/min,振蕩20 min。酸性軟質水果需在振蕩過程中,每隔10 min檢測pH,如pH低于9.0時,使用1 mol/L NaOH調pH至9.5,每調整一次pH,延長振蕩時間10 min。

4、將振蕩液轉移至離心管,如體枳較大,可使用2根離心管。10000 r/min,4℃,離心30 min。取上清至干凈試管或三角瓶,用1 mol/L HCl調pH至7.0。

5、加入0.25倍體積 5XPEG/NaCl溶液,使終溶液濃度為100 g/L PEG,0.3 mol/L NaCl。60 s搖勻,4℃,60 次/min,振蕩60 min。10000 r/min,4℃,離心 30 min,棄上清。10000 r/min,4℃,離心5 min,緊實沉淀,棄上清。

6、500 μL PBS懸浮沉淀。如食品樣品為生食蔬菜,可直接將懸浮液轉移至干凈試管,測定并記錄懸浮液毫升數,用于后續RNA提取。

如食品樣品為軟質水果,將懸浮液轉移至耐氯仿試管中。加入500 μL氯仿/丁醇混合液,渦旋混勻,室溫靜置5 min。10000 r/min,4℃,離心 15 min,將液相部分仔細轉移至干凈試管,測定并記錄懸浮液毫升數,用于后續RNA提取。


按照常規的提取軟質水果和生食蔬菜的病毒,整個實驗過程需要,至少使用離心機 3 次以上……


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